技術(shù)支持

1、 標本的固定：不當的固定方式或固定時(shí)溫度過(guò)高，都會(huì )影響到所檢測的抗原的數量和質(zhì)量。查看一抗說(shuō)明書(shū)或相關(guān)文獻，使用推薦的固定液（如10%中性緩沖福爾馬林固定液等）。

2、抗原的修復方式：煮沸修復和高壓修復是國際公認的較好的修復方式，但具體使用那種修復方式應根據預實(shí)驗結果或廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行選擇。

3、抗體的稀釋度是否過(guò)高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確。應參照使用范圍，對所使用的一抗進(jìn)行梯度測試，找出最佳的使用濃度。通常，如果背景染色很少或沒(méi)有，可適當延長(cháng)孵育時(shí)間。

4、切片上遺留了過(guò)多的沖洗液，當抗體加至切片上時(shí)，等于人為地對抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋。

5、 孵育時(shí)切片是否放置水平，否則會(huì )導致抗體流失。

1、抗體孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)、抗體濃度高易增加背景著(zhù)色，這可通過(guò)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來(lái)控制。

2、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著(zhù)色，建議試用單克隆抗體。

3、內源性過(guò)氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過(guò)延長(cháng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色。

4、非特異性組分與抗體結合，這需要通過(guò)延長(cháng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當增加濃度來(lái)加強封閉效果。

5、DAB孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)或濃度過(guò)高，可通過(guò)降低DAB濃度或者縮短孵育時(shí)間來(lái)降低背景染色。

6、PBS沖洗不充分，殘留抗體結果增強著(zhù)色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要。

7、標本染色過(guò)程中經(jīng)常出現干片，這容易增強非特異性著(zhù)色，確保實(shí)驗過(guò)程中保證切片的濕潤。

8、抗體稀釋液的pH值偏低和封閉血清的失效。